【Penggunaan yang dimaksudkan】

Kit ini adalah TaqMan probe real-time fluorescent PCR untuk secara kualitatif mendeteksi ORF1ab, N gen asam nukleat 2019-nCoV dalam usap tenggorokan, dahak pada pasien dengan gejala pneumonia yang dicurigai dan kasus Clustering.

Hasil tes hanya untuk referensi klinis dan tidak dapat dianggap sebagai satu-satunya patokan untuk diagnosis klinis. Direkomendasikan untuk membuat analisis nyata sehubungan dengan gejala klinis dan hasil laboratorium lainnya.

Operator harus memiliki pengalaman pelatihan profesional dalam amplifikasi gen atau pengujian metode biologi molekuler, dan memiliki kualifikasi yang relevan untuk operasi laboratorium. Laboratorium harus memiliki tindakan pencegahan keamanan biologis dan prosedur perlindungan yang wajar.

【Prinsip Tes】

Dalam kit ini, primer dan probe dirancang untuk masing-masing region yang dilestarikan dan spesifik dari ORF1ab, N dari 2019-nCoV. Fluorescent PCR digunakan untuk mendeteksi RNA virus setelah pemurnian asam nukleat dari sampel RNA.

Kit uji ini menggunakan teknologi PCR fluoresen waktu nyata. Selama amplifikasi PCR, probe berikatan dengan template, dan kelompok reporter ujung 5' dari probe dibelah oleh enzim Taq (5'→3' aktivitas eksonuklease), dengan demikian bergerak menjauh dari kelompok pendinginan untuk menghasilkan sinyal fluoresen. Kurva amplifikasi waktu nyata secara otomatis diplot berdasarkan sinyal fluoresensi yang terdeteksi, dan nilai sampel Ct dihitung (Jumlah siklus yang dialami ketika sinyal fluoresensi di setiap tabung reaksi mencapai ambang batas yang ditentukan). FAM ,VIC dan fluorofor merah Texas digunakan untuk menandai gen ORF1ab , probe gen N dalam larutan reaksi. Dengan menggunakan satu pengujian, deteksi kualitatif kedua gen 2019-nCoV di atas dapat dilakukan secara bersamaan.

Untuk menghindari hasil negatif palsu, kit dilengkapi dengan kontrol internal (IC), yang ditandai dengan kelompok fluoresen Cy5 yang dapat digunakan untuk memantau prosedur ekstraksi dan larutan reaksi.

【Komponen utama】

Catatan¹: Banyaknya komponen yang berbeda tidak dapat ditukar.

Catatan²: Test kit tidak mengandung reagen ekstraksi asam nukleat, harap siapkan reagen sebelum digunakan.

1. Penanganan sampel

Tambahkan 10μL kontrol internal ke dalam 200μL kontrol positif dan kontrol negatif, masing-masing untuk melakukan ekstraksi asam nukleat.

2. Persiapan reagen:

Persiapan sistem: Ambil lyophilizer amplifikasi asam nukleat yang telah dipasang sebelumnya, kemudian dibuka dengan kantong foil dan segera disentrifugasi. Jumlah sampel dari setiap pengujian harus kelipatan 8 yang berisi satu kontrol positif dan satu kontrol negatif. Tambahkan 35μL air bebas nukleus ke setiap tabung reaksi.

3. Contoh Memuat:

Tambahkan 5μL Sampel asam nukleat yang akan diuji, kontrol positif, kontrol negatif sehingga seluruh volume reaksi adalah 40 L dalam larutan reaksi yang dialokasikan. cairan di dinding tabung di bagian bawah tabung, sehingga proses amplifikasi PCR.

Setelah diverifikasi, diperkirakan penambahan 5μL-10μL Minyak parafin dalam sistem PCR tidak akan mempengaruhi hasil PCR tetapi menghindari kontaminasi dan penguapan cairan.